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糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒

簡(jiǎn)要描述:

糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。

更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:1385

商品屬性:

貨號(hào)

規(guī)格

檢測(cè)方法

YSH3410

100管/96樣

微量法

YSH3410-1

50管/48樣

紫外分光光度法


商品詳情:
糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒測(cè)定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。糖原的分解主要在GPa的催化下進(jìn)行。

測(cè)定原理:

未添加激活劑時(shí),GPa催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。

試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。


測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

4. 測(cè)定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A測(cè)定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

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