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倉(cāng)鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒操作步驟
更新時(shí)間:2019-06-19   點(diǎn)擊次數(shù):1132次

倉(cāng)鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠胰島素(INS)水平。用純化的小鼠胰島素(INS)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入小鼠胰島素(INS),再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中小鼠胰島素(INS)含量。

倉(cāng)鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

 

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